No Image

Иммунохроматографический анализ в ветеринарии

СОДЕРЖАНИЕ
165 просмотров
10 марта 2020

Иммунохроматографический анализ (ИХА) — иммунохимический метод анализа, основанный на принципе тонкослойной хроматографии и включающий реакцию между антигеном и соответствующем ему антителом в биологических материалах. Проводится с помощью специальных тест-полосок, панелей или тест-кассет (см. рис. 9.21).

Метод основан на сепарации микрочастиц методом парной связки и реакции между антигеном и соответствующим ему антителом в биологических материалах (моче, цельной крови, сыворотке или плазме крови, слюне, кале и т.д.). Данный вид анализа осуществляется при помощи индикаторных полосок, палочек, панелей или тест-кассет, которые обеспечивают быстроту проведения тестирования. ИХА — сравнительно новый метод анализа, который часто обозначается в литературе также как метод сухой иммунохимии, стрип-тест, QuikStrip cassette, QuikStrip dipstick, экспресс-тест или экспресс-анализ. Эти названия связаны с быстротой проведения такого анализа.

Принцип действия иммунохроматографического теста состоит в том, что при погружении тест-полоски в физиологическую жидкость последняя начинает мигрировать вдоль полоски по принципу тонкослойной хроматографии. Подвижной фазой в данном случае является физиологическая жидкость. Вместе с жидкостью движутся и антитела с красителем. Если в этой жидкости присутствует исследуемый антиген (гормон, инфекционный или онкологический маркер, токсин), то происходит его связывание как с первым, так и со вторым типом антител. При этом антитела с красителем накапливаются вокруг антител, жестко иммобилизованных в тест-зоне ИХА-полоски, что проявляется в виде яркой окрашенной полосы. Свободные антитела с красителем мигрируют далее вдоль полоски и неизбежно взаимодействуют со вторичными антителами в контрольной зоне, в которой и наблюдается вторая окрашенная (контрольная) полоса (рис. 10.2).

Рис. 10.2. Схема ИХА:

К — контрольная полоса; Т — тест-зона

Взаимодействие (и окрашенная полоса) в контрольной зоне должно проявляться всегда (если анализ проведен правильно), независимо от присутствия исследуемого антигена в исследуемом субстрате. Результаты определяются визуально в период с 3-й по 8-ю мин.

Метод иммунной хроматографии основан на особенном свойстве антител связываться с антигеном специфическим (т.е. избирательным) образом. Это означает, что каждое антитело узнает только специфический антиген и связывается с ним. На этой уникальной особенности антител и основаны все иммунологические методы анализа, в том числе и ИХА. Причем определяемым «антигеном» в данном методе анализа может служить и определяемое в биоматериале антитело к инфекционному агенту (или аутоантитела), тогда остальные используемые в тесте антитела будут являться антиантителами.

В ИХА-тестах используется три типа антител.

  • 1. Подвижные моноклональные антитела к исследуемому антигену или антителу, конъюгированные («сшитые») с коллоидным золотом — красителем, который можно легко идентифицировать даже в самых малых концентрациях. Эти антитела нанесены вблизи участка погружения тест-полоски в физиологическую жидкость (мочу, кровь).
  • 2. Поликлональные к исследуемому антигену или антителу антитела, жестко иммобилизованные в тест-зоне полоски.
  • 3. Вторичные антитела к моноклональным антителам, жестко иммобилизованные в контрольной зоне тест-полоски.

Существует два формата ИХА: прямой и конкурентный.

1. В варианте прямого (сэндвичного) ИХА используют конъюгат антитела-метки, нанесенный на мембрану для конъюгата. На тестовой полоске иммобилизованы антитела, специфические к конкретному аналиту, а на контрольной линии — антивидовые антитела, специфические к первичным антителам. При нанесении образца, содержащего анализируемое вещество, при попадании образца на мембрану с конъюгатом происходит связывание искомого вещества с конъюгатом Ат-метка. Затем образовавшийся иммунный комплекс попадает в тестовую зону, где он связывается со специфическими антителами, образуя «сэндвич» Ат-Аг-Ат-метка. Далее избыток несвязавшегося конъюгата связывается с антивидовыми антителами на контрольной линии. Выявление двух линий на тест-полоске является положительным результатом теста. При отсутствии аналита в образце конъюгат связывается с антивидовыми антителами только на контрольной линии, образуя одну линию на тест-полоске.

Прямой ИХА используется для выявления возбудителей инфекционных заболеваний, высокомолекулярных соединений — вирусов, в том числе ВИЧ, различных гормонов (например, в тестах на беременность).

2. Вариант конкурентого ИХА используется для определения низкомолекулярных соединений. Он основан на конкуренции аналита и иммобилизованного конъюгата аналит: белок-носитель за ограниченное количество центров связывания специфических антител, содержащихся в конъюгате Ат-метка. При нанесении образца, в котором 194

содержится аналит, последний связывается с конъюгатом Ат-метка на мембране с конъюгатом. В дальнейшем иммунокомплекс проходит через тестовую зону, где иммобилизован конъюгат аналит: белок-носитель. Иммунокомплекс не может связаться с этим конъюгатом из-за стерических затруднений: низкомолекулярные соединения обычно имеют одну антигенную детерминанту, а иммуноглобулины имеют один центр связывания с антигеном, который уже является занятым аналитом. Впоследствии иммунный комплекс связывают антивидовые иммуноглобулины, находящиеся на контрольной линии. Отсутствие окрашенной полосы в тестовой зоне и наличие окраски в контрольной зоне свидетельствует о том, что концентрация определяемого вещества в исследуемом образце превышает его пороговое значение для данного теста. При отсутствии в аналите анализируемого вещества в образце конъюгат Ат-метка связывается с конъюгатом Аг : белок-носитель, иммобилизованным в зоне тестовой линии. Свободный конъюгат Ат-метка попадает в зону контрольной линии и связывается там с ан- тивидовыми антителами. Наличие двух окрашенных линий (тестовой и контрольной) является отрицательным результатом анализа.

Вариант конкурентного ИХА используют для выявления низкомолекулярных соединений, в том числе в экстрактах тканей.

Преимущества метода — быстрота и легкость применения, возможность использования неприборных форматов ИХА с визуальной оценкой результата. Не требуется использования никакого оборудования, и анализ может быть проведен неспециалистом в любых условиях, в том числе полевых.

Метки, используемые в ИХА. В качестве меток в ИХА используются различные вещества и частицы.

  • 1. Красители (наночастицы коллоидного золота или углерода либо частицы окрашенного латекса). Этот вариант обеспечивает визуальную детекцию результата либо его приборное колориметрическое определение (или сканирование). Использование красящих меток, присоединенных к носителю (частицам латекса), позволяет проводить мультианализ, в котором линии разного цвета соответствуют различным аналитам. Чаще всего используемой меткой являются наночастицы коллоидного золота.
  • 2. Ковалентно связанные с частицами латекса флуоресцентные, фосфоресцентные и биолюминесцентные метки. Они используются только в приборных вариантах ИХА, в которых результат регистрируется специальным ридером. Из всех вариантов наиболее распространены флуоресцентные метки.
  • 3. Закрепленные на частицах латекса парамагнитные метки. Метод используется в ИХА с применением приборов, регистрирующих силу магнитного поля.
  • 4. Ферментные метки используются по принципу ИФА. Реакция регистрируется с помощью окрашивания субстратов, и результат анализа является визуальным или считывается с помощью ридера.
  • 5. Использование липосом в качестве носителей различного рода меток (красящих, флуоресцентных, ферментативных, электроактив- ных и пр.) является новым направлением в разработке различных разновидностей ИХА.
Читайте также:  Глюкоза при хпн у кошек

Морозова В. С., Габрильянц О. А., Мягкова М. А.,

3.2.4. Иммунохроматографический анализ

К иммунохимическим методам относится также метод иммунохроматографического анализа (ИХА, экспресс-тесты) – качественный скрининговый предварительный метод, позволяющий быстро, в течение нескольких минут, провести анализ в любых условиях, в т.ч. «полевых» [17]. Этот метод заслуживает наиболее пристального внимания, т.к. является самым распространенным при выявлении ПАВ и не требует оборудования и специалистов для проведения. Экспресс-тесты используют в химико-токсикологических лабораториях для скрининга, при прохождении медосмотров при устройстве на работу, при тестировании абитуриентов и студентов вузов. Метод может использоваться для тестирования водителей на дорогах, в домашних условиях родителями для контроля детей. Объектами исследования в данном случае являются моча, жидкость ротовой полости, потожировые выделения (редко).

К преимуществам ИХА следует отнести:

● быстроту и легкость в использовании;

● малые объемы образца, отсутствие пробоподготовки;

● дешевизну для производителя и потребителя;

● возможность производства тестов в больших объемах;

● простоту чтения и интерпретации результата;

● высокую чувствительность и вопроизводимость;

● возможность количественного определения;

● возможность использования портативных ридеров, совместимых с компьютером;

В связи с большим количеством преимуществ по сравнению с другими скрининговыми методами, ИХА получил широкое применение
и находится на первом месте на мировом рынке диагностики. ИХА применяется в различных областях медицины и народного хозяйства:

● банки крови и плазмы;

● промышленность (контроль качества, безопасности, идентификация продукта, эко-контроль);

● сельское хозяйство, агрономия;

Тест-полоски для ИХА являются чрезвычайно удобными и простыми в использовании, однако они имеют сложное строение и процесс разработки каждого вида ИХА является чрезвычайно трудоемким и высокотехнологичным.

ИХА-тест (иммунохроматографическия полоска) состоит из следующих основных элементов: пластиковой подложки, на которую наклеены все остальные компоненты теста, фильтра (прокладки для образца), прокладки или мембраны с конъюгатом, хроматографической мембраны, содержащей одну или несколько зон захвата иммунных комплексов и контрольную зону захвата, мембраны абсорбции (впитывающая прокладка) (рис. 13). Тест-полоска может быть помещена в пластиковый корпус, в котором имеется приемное и тестовые «окна».

Рис. 13. Схематическое изображение иммунохроматографической тест-полоски

Метод ИХА, так же как и ИФА, имеет несколько форматов. Наиболее распространены 2 схемы: прямой (сэндвичный) и непрямой конкурентный метод.

В схеме прямого (сэндвичного) ИХА используется конъюгат специфических антител с красящей меткой (в случае визуальной оценки результата), нанесенный на мембрану для конъюгата. На тестовой линии иммобилизованы антитела, специфические к данному аналиту, а на контрольной линии – антивидовые антитела, специфические к первичным антителам. При нанесении образца, содержащего анализируемое вещество, на мембране с конъюгатом происходит связывание аналита с конъюгатом Ат-метка. Затем иммунный комплекс попадает в тестовую зону, где он связывается со специфическими антителами, образуя «сэндвич» Ат-Аг-Ат-метка. избыток несвязавшегося конъюгата связывается с антивидовыми антителами на контрольной линии. Таким образом, выявление 2-х линий на тест-полоске является положительным результатом теста. При отсутствии аналита в образце конъюгат связывается с антивидовыми антителами только на контрольной линии, образуя одну линию на тест-полоске (рис. 14).

Рис. 14. Схема прямого (сэндвичного) ИХА

Метод прямого ИХА используется для выявления высокомолекулярных соединений – вирусов, в т.ч. ВИЧ; различных гормонов (например, в тестах на беременность), возбудителей инфекционных заболеваний.

Схема сэндвичного ИХА не подходит для определения низкомолекулярных веществ, т.к. для образования сэндвича Ат-Аг-Ат антиген должен иметь по крайней мере две антигенные детерминанты (т.е. центра связывания с антителами). Кроме того, из-за стерических затруднений образование такого двойного комплекса с низкомолекулярным антигеном маловероятно. Поэтому для анализа небольших молекул, в том числе наркотических веществ, используется другая схема – непрямой конкурентный ИХА.

Метод конкурентого ИХА основан на конкуренции аналита и иммобилизованного конъгата аналит:белок-носитель за ограниченное количество центров связывания специфических антител, содержащихся в конъюгате Ат-метка. При нанесении образца, содержащего аналит, он связывается с конъюгатом Ат-метка на мембране с конъюгатом (рис. 15). Далее иммунокомплекс проходит через тестовую зону, где на иммобилизован конъгат аналит:белок-носитель. Иммунокомплекс не может связаться с этим конъюгатом из-за стерических затруднений: низкомолекулярные соединения обычно имеют одну антигенную детерминанту и, соответственно, антитела имеют один центр связывания с антигеном, который уже является занятым аналитом. Далее иммунный комплекс связывают антивидовые антитела, находящиеся на контрольной линии. В результате, отсутствие окрашенной полосы в контрольной зоне свидетельствует о том, что концентрация определяемого вещества в исследуемом образце превышает его пороговое значение для данного теста.

При отсутствии анализируемого вещества в образце конъюгат Ат-метка связывается с конъюгатом Аг:белок-носитель, иммобилизованным в зоне тестовой линии. Несвязавшийся конъюгат Ат-метка попадает в зону контрольной линии и связывается там с антивидовыми антителами. Таким образом, наличие двух окрашенных линий (тестовой и контрольной) является отрицательным результатом анализа (рис. 15). Формат конкурентного ИХА используется для выявления низкомолекулярных соединений, в том числе метаболитов наркотических соединений в моче, жидкости ротовой полости, экстрактах тканей.

Схема оценки результатов ИХА наркотических веществ представлена на рис. 16. Результат теста является недействительным при отсутствии контрольной линии, т.к. этот факт может свидетельствовать о незавершенной процедуре анализа, либо о том, что иммунохимическая реакция не прошла должным образом по какой-либо причине (из-за испортившихся иммунореагентов или несоблюдения инструкции по применению теста).

Рис. 15. Схема конкурентного ИХА

Рис. 16. Схема оценки результатов ИХА метаболитов наркотических веществ

Часто, особенно в случаях когда недоступны большие количества биообразца для анализа, например, для определения наркотических веществ в слюне, используются тест-полоски в пластиковой кас-
сете (рис. 17).

Рис. 17. Пластиковый корпус иммунохроматографического теста

В качестве меток в ИХА используются различные частицы, обладающие следующими свойствами:

1. Красящие вещества (нано-частицы коллоидного золота или углерода, или частицы окрашенного латекса). В этом случае используется визуальная детекция результата, либо приборное рефлектометрическое определение (например, сканирование). Использование различных красящих меток, присоединенных к частицам латекса, позволяет проводить мильтианализ, в котором линии разного цвета соответствуют различным аналитам. Наиболее часто используемой меткой является нано-частицы коллоидного золота, которые образуют линии темно-бурого (или темно-розового) цвета.

2. Флуоресцентные, фосфоресцентные и биолюминисцентные метки, ковалентно связанные с частицами латекса. Эти метки используются только в приборных вариантах ИХА, когда результат регистрируется специальным ридером. Среди вышеуказанных наиболее распространены флуоресцентные метки.

Читайте также:  Траумель капли для кошек

3. Парамагнитные метки (также закрепленные на частицах латекса). Данный вид меток используется в ИХА с применением приборов, регистрирующих силу магнитного поля.

4. Ферментные метки используются по тому же принципу, что и в ИФА. Ферментативная реакция регистрируется с помощью окрашивания субстратов, и результат анализа является визуальным, или считывается с помощью ридера.

5) Новым направлением в разработке различных разновидностях ИХА является использование липосом в качестве носителей различного рода меток (красящих, флуоресцентных, ферментативных, электроактивных и пр.) [17].

Разработка технологических стадий иммунохроматографического анализа является наукоемким, высокотехнологичным и многостадийным процессом: он включает в себя подбор материалов, реагентов и условий проведения анализа на нескольких этапах разработки ИХА. Перечислим основные этапы разработки:

● выбор материалов для производства тест-полосок;

● подбор оптимальных концентраций иммунореагентов: конъюгатов Ат-метка, конъюгатов антиген-белок-носитель, антивидовых антител;

● подбор дополнительных реагентов для предобработки компонентов тест-полоски (позволяет улучшить свойства потока, и тем самым обеспечить лучшую чувствительность теста);

● подбор реагентов и их концентраций для «забивки» мембраны, если это необходимо (позволяет улучшить характеристики анализа и стабильность теста);

● оптимизация условий проведения анализа реальных образцов;

● изучение стабильности тест-системы, выбор условий хранения и упаковки для увеличения срока хранения тестов.

На рис. 18 представлена схема производства иммунохроматографических тестов. На каждом этапе данной технологической схемы должна быть произведен выбор материалов и реагентов, оптимизация условий проведения технологической стадии.

Все компоненты тест-полоски (фильтр, мембрана с конъюгатом, хроматографическая мембрана, мембрана абсорбции, см. рис. 13) приклеиваются на пластиковую подложку. Подложка – это лист, состоящий из пластика и имеющий клейкое покрытие. При выборе подложки необходимо обращать внимание на качество клея (это может напрямую влиять на характеристики хроматографической мембраны, которая будет приклеена на подложку) и удобство покрывающей пленки (что обеспечивает точность приклеивания компонентов полоски на подложку).

При выборе материала фильтра для образца необходимо руководствоваться теми функциями, которые должен выполнять фильтр:

● впитать достаточное количество образца и доставить его в мембрану для конъюгата;

● довести рН образца до оптимального;

● увеличить или уменьшить вязкость образца для достижения оптимальной скорости прохождения образца по хроматографической мембране;

● увеличить способность образца растворить конъюгат;

● уменьшить забивку мембраны за счет добавления забивки в прокладку для образца.

Рис. 18. Схема стадий производства иммунохроматографических тестов

Фильтры выпускаются из различных пористых материалов: целлюлозы, стекловолокна, тканных сит. Мембраны для конъюгатов производят из стекловолокна, целлюлозы, поверхностно модифицированного полиэфира или искусственных волокон. Подложка для конъюгата должна обладать высокой адсорбционной способностью с одной стороны, и легкостью «смывания» конъюгата из данной зоны, с другой. Т.е. при прохождении жидкости конъюгат должен хорошо десорбироваться из мембраны. При этом при сушке мембраны после нанесения раствора конъюгата не должно происходить изменение конформации антител и разрушения структуры конъюгата.

Хроматографическая мембрана – самый важный элемент иммунохроматографической полоски. Именно на ней проходит иммунохимическая реакция, происходит разделение и связывание иммунореагентов в тестовой и контрольной зонах. Мембрана является самой длинной зоной тест-полоски, именно здесь иммунореагенты проходят максимальный путь в латеральном потоке. При выборе материала для хроматографической мембраны необходимо руководствоваться следующими свойствами, которыми должна обладать мембрана:

1. Гидрофильность – необходима для возможности прохождения потока (а это водная среда) через мембрану. Обеспечивается выбором материала, а также использованием ПАВ.

2. Способность связывать белки: для формирования тестовой и контрольной линии на мембране необходимо закрепить белковые конъюгаты таким образом, чтобы они не смылись латеральным потоком. Белки «прикрепляются» к мембране с помощью электростатического взаимодействия: диполи, содержащиеся в нитроцеллюлозе, связывают диполи белков (рис. 19).

Рис. 19. Диполи нитроцеллюлозы и белков

Для лучшего закрепления белков на мембране после нанесения растворов конъюгатов и антител на мембрану используют «забивку» или блокировку мембраны: ее обрабатывают раствором инертного белка, чтобы занять все вакантные поры, в которые могли бы мигрировать молекулы белковых конъюгатов и антител, находящихся на контрольной и тестовой линиях. Кроме того, в растворах белков необходимо использовать буфер с нужной кислотностью, чтобы обеспечить максимальное электростатическое взаимодействие диполей нитроцеллюлозы и белков.

При производстве мембран для ИХА используются следующие материалы: нитроцеллюлоза (наиболее распространенный материал, используется в 99 % выпускаемых тест-полосок); нейлон; поливинилиденфторид; полиэфирсульфон; стекловолокно.

При выборе материала мембраны необходимо руководствоваться следующими ее физическими параметрами, которые характеризуют свойства латерального потока, проходящего через данную мембрану:

● толщина мембраны, ее объем слоя;

● пористость, размер и распределение пор;

● номинальная скорость потока;

● прочность (предел прочности на разрыв);

● качество поверхности: неровности, порошок и пыль, оставшиеся на поверхности после производства материала.

Все перечисленные характеристики формируют в конечном итоге главный параметр иммунохроматографической мембраны – скорость латерального потока, определяющий все основные параметры ИХА (рис. 20).

Рис. 20. Влияние скорости потока на характеристики анализа

Все вышеописанные подробности приведены для того, чтобы дать представление о сложности процесса разработки и производства на первый взгляд простых тест-полосок. Для того чтобы получить действительно работающий качественный тест, необходимо очень тщательно пройти все стадии разработки и наладки производства. К сожалению, не все нынешние производители это делают на должном уровне, экономя средства для достижения минимальных цен на рынке. В результате мы имеем общепринятое мнение о неточности ИХА тестов. В то же время качественный ИХА тест может иметь характеристики не хуже, чем тест-система для приборного метода ИФА [17].

Современные материалы и возможности тщательного подбора условий при производстве ИХА тестов позволяют разработать даже количественные варианты ИХА. В этом случае детекция результата осуществляется с помощью специальных считывающих устройств – ридеров для ИХА. В зависимости от типа метки, данные устройства осуществляют различные способы детекции: рефрактометрический, флуоресцентный, магнитный (рис. 21).

Рис. 21. Считывающие устройства для детекции результатов ИХА

Рис. 22. Автоматическая платформа для производства ИХА полосок

Количественный формат ИХА характеризуется гораздо большими требованиями к качеству тест-полосок, и, следовательно, к контролю качества каждой стадии производства тестов. Кроме качества материалов и реагентов, на каждой стадии производства необходимо четко, с высокой точностью, контролировать температуру, влажность, концентрацию реагентов, скорость подачи материалов, давления прессов и т.д. Только в этом случае можно получить количественный ИХА тест. Столь высокие требования возможно выполнить только с использованием специальных закрытых, полностью автоматизированных платформ, в которых каждый из параметров контролируется и поддерживается с высокой точностью (рис. 22).

Читайте также:  Люди с кошачьими глазами фото

Что представляет собой иммунохроматографический анализ (ИХА)? Разберемся подробнее в этом вопросе.

ИХА – иммунохимический способ анализа, который основан на методе тонкослойной хроматографии. Он включает реакцию между соответствующим антителом и антигеном в биологических материалах. Осуществляется посредством особых тест-полосок, тест-кассет или панелей. ИХА – это экспресс-тест.

Сущность данного метода исследования

Действие его основывается на том, что при погружении в биологическую жидкость (либо другой жидкий образец) теста она начинает двигаться вдоль полоски по методу тонкослойной хроматографии. Движутся вместе с ней нанесенные на нее специфические меченые антитела, которые связываются аффинно с анализируемым компонентом.

Различаются два формата анализа: прямой и конкурентный метод.

Прямой метод

В формате сэндвичного (прямого) иммунохроматографического анализа крови используется конъюгат антитела-метки, который наносится для конъюгата на мембрану. Иммобилизованные антитела на полоске, обладающие конкретным аналитом, на контрольной линии – антитела антивидовые, специфические к антителам первичным.

При внесении образца, в котором содержится конъюгат (искомое вещество), на мембрану, связывается искомый компонент с конъюгатом Ат-метки. После этого сформированный иммунный комплекс проникает в тестовую зону, где происходит связь со специфическими антителами, и образуется «сэндвич» Ат- Аг-Ат-метка. Затем чрезмерное количество не связавшегося конъюгата соединяется на контрольной линии с антивидовыми антителами. Если на тест-полоске появляются две линии, то результат теста положительный. Если аналит отсутствует в образце, то связывается конъюгат с антивидовыми антителами лишь на контрольной линии, и образуется одна линия.

Прямой ИХА применяется для определения возбудителей инфекционных патологий, вирусов – высокомолекулярных соединений, включая разные гормоны, ВИЧ.

Конкурентный метод исследования

Способ конкурентного иммунохроматографического анализа применяется для установления низкомолекулярных соединений. Основан он на конкуренции иммобилизованного конъюгата аналит и аналита: носитель-белок за ограниченное число центров связывания периферических антител, которые содержатся в конъюгате Ат-метка. Когда наносится образец, содержащий аналит, то последний связывается на мембране с конъюгатом с конъюгатом Ат-метка. Иммунокомплекс в дальнейшем проходит через тестовую зону, в которой иммобилизуется конъюгат аналит, то есть белок-носитель.

С этим конъюгатом не может связаться иммунокомплекс из-за стерических сложностей: низкомолекулярные соединения чаще всего обладают одной антигенной детерминантой, таким образом, у иммуноглобулинов есть один центр связи с антигеном, который уже занят до этого аналитом. Иммунный комплекс впоследствии связывается антивидовыми иммуноглобулинами, которые находятся на контрольной линии. Если в тестовой области отсутствует окрашенная полоса и есть окраска в контрольной зоне, это говорит о том, что содержание определяемого компонента в исследуемом образце выше порогового значения для такого теста. Если в аналите отсутствует анализируемое вещество в образце, то происходит связь конъюгата Ат-метка с конъюгатом Аг: носитель-белок, иммобилизованный в области тестовой линии. Ат-метка свободный конъюгат попадает в сферу контрольной линии, где связывается с антивидовыми антителами. Если есть две окрашенные линии (контрольная и тестовая), то можно говорить об отрицательном результате теста.

Метод конкурентного ИХА применяется для определения низкомолекулярных соединений, включая тканевые экстракты.

Преимущество такого способа – легкость и быстрота использования, возможность применения неприборных методов ИХА с оценкой результата визуально. Не требуется дополнительное оборудование, и анализ может провести человек без медицинского образования в любое время.

Какие применяются метки в ИХА?

В иммунохроматографическом анализе в качестве меток применяются разные частицы и вещества.

  • Красители (частицы крашеного латекса, или наночастицы углерода, или коллоидного золота). Такой вариант позволяет визуально отслеживать результат или определить колориметрическим прибором. Применение красящих меток, которые присоединяются к носителю, позволяет делать мультианализ, где разноцветные линии соответствуют разным аналитам. Используемой меткой чаще всего выступают наночастицы золота коллоидного.

  • Связанные ковалентно с латексными частицами биолюминесцентные, фосфоресцентные и флуоресцентные метки. Применяются лишь в приборных способах ИХА, в которых регистрируется результат особым ридером. Наиболее распространенными являются флуоресцентные метки.
  • Парамагнитные метки, закрепленные на латексных частицах. Метод применяется в ИХА с использованием приборов, которые регистрируют силу магнитного поля.
  • Липосомы, используемые в качестве носителей разных меток (электроактивных, ферментативных, флуоресцентных, красящих и т. д.) Это новое направление среди разновидностей анализа.
  • Ферментные метки, применяемые по принципу ИФА. Регистрация реакции проводится посредством окрашивания субстратов. В итоге получается визуальный результат, либо считывается ридером.

Преимущества данного метода исследования

Главными преимуществами применения метода иммунохроматографического анализа становятся:

  • Удобство и простота – позволяет получить результат (первичное представление и анализ причины болезни) без специальных навыков и оборудования.
  • Надежность – достоверность тестов достигает 99,8 %, каждый тест при этом имеет внутренний встроенный контроль.
  • Анонимность – это особенно важно при определении болезней, передаваемых половым путем, прочих инфекционных болезней, а также установлении употребления наркотических веществ.
  • Экономичность – приобрести тест может каждый, экономится время на проведение анализа.
  • Независимость – не нуждается в предварительной консультации и рецепте врача.

Тест на наркотики как проводится: особенности и недостатки ИХА-метода

Самой популярной услугой становится анализ мочи на наркотики посредством метода иммунохроматографического анализа. Это позволяет исследовать мочу на 14 видов нарковеществ.

Иммунохроматографический анализ на наркотики также считается экспресс-методом диагностики. Результат теста можно узнать спустя 15 минут. Для проведения данного исследования используют особые тест-полоски, которые пропитаны веществами-индикаторами. Если в моче имеются следы наркотического вещества, цвет полоски меняется. Основной недостаток такого анализа – невозможность определить, какова концентрация вещества и степень наркотического опьянения, таким образом, результаты иммунохроматографического анализа в качестве доказательства в суде использовать не получится.

Каков результат такого анализа?

Если на индикаторах появились две розовые полосы, то делается заключение, что в моче не содержится наркотик, или же его концентрация недостаточна для определения иммунохроматографическим методом. При возникновении одной розовой полосы можно говорить о наличии наркотического вещества: марихуаны, производных эфедрона, опиатов, производных барбитуровой кислоты, амфетаминов, кокаина, фенциклидина, бензодиазепинов, экстази.

Какие можно сделать выводы?

Иммунохроматографический анализ (экспресс-тест) является эффективным средством диагностики, он позволяет визуально на протяжении нескольких минут выявить и оценить концентрацию антигенов, гормонов, антител и других диагностически важных компонентов в человеческом организме. Экспресс-тесты имеют высокую степень точности и чувствительности, обнаруживается более ста видов болезней, а также весь спектр наркотических веществ, и достоверность анализа очень высокая.

Комментировать
165 просмотров
Комментариев нет, будьте первым кто его оставит

Это интересно
No Image Животные
0 комментариев
No Image Животные
0 комментариев
No Image Животные
0 комментариев